Micropropagación de Phragmipedium kovachii, con fines de conservación genética

We stablished a micropropagation protocol of Phragmipedium kovachii, for preservation, germination and the effect of auxins and cytokinins were evaluated during the multiplication phases of protoorms and rooting of seedlings of Phragmipedium kovachii. The research was conducted in the Plant Tissue Cultivation Laboratory (LCTV) of the Faculty of Agricultural Sciences at the National University of San Martín - Tarapoto. The seed of Phragmipedium kovachii, was from the Alto Mayo area, the percentage of seed germination was evaluated (Galvez, 2005), with pH modified to 7. For multiplication and rooting tests, a Design was used Completely Random (DCA), with different concentrations of auxins and cytokinins with 4 treatments, 5 repetitions and 5 protoorms (multiplication phase), and 4 treatments with 5 repetitions and 10 seedlings (phase rooting). The results showed a germination percentage of 60,48%, in addition; in the multiplication phase, in the first days the color in the protoorms was green (V) in all the treatments, but it was changing according to the time, until the brown coloration (phenolized) (F) became dominant. According to the Tukey Test (P <0,01), in the indicators number of leaves per proto-form, growth rate and length of proto-form, T3 was the most significant. In the rooting phase, the Tukey test (P <0,01), in the indicators seedling height (cm), number of roots/seedling and length of roots/seedling, it was obtained that the treatments do not differ from each other statistically. Concluding that, the protocol used is appropriate to propagate seedlings of Phragmipedium kovachii under in vitro conditions.Se estableció un protocolo de micro propagación de Phragmipedium kovachii, con fines de conservación, se evaluó la germinación y el efecto de auxinas y citoquininas durante las fases de multiplicación de protocormos y enraizamiento de plántulas de Phragmipedium kovachii. La investigación se realizó en el Laboratorio de Cultivo de Tejidos Vegetales de la Facultad de Ciencias Agrarias en la Universidad Nacional de San Martín. La semilla de Phragmipedium kovachii, procedió de la zona del Alto Mayo, se evaluó el porcentaje de germinación según (Gálvez, 2005), con pH modificado a 7. Para la multiplicación y enraizamiento, se utilizó un diseño completamente al azar (DCA), con diferentes concentraciones de auxinas y citoquininas con 4 tratamientos, 5 repeticiones y 5 protocormos (fase de multiplicación), y 4 tratamientos con 5 repeticiones y 10 plántulas (fase de enraizamiento). Los resultados mostraron una germinación de 60,48% y en la fase de multiplicación, en los primeros días, los protocormos mostraron un color Verde (V) en todos los tratamientos, pero fue cambiando con el tiempo, al color marrón (fenolizada) (F). Según la Prueba de Tukey (P<0,01), en los indicadores número de hojas por protocormo, tasa de crecimiento y longitud de protocormo, el T3 fue el más significativo. En la fase de enraizamiento, la prueba de Tukey (P<0,01), para altura de plántulas (cm), número de raíces/plántula y longitud de raíces/plántula, se observó que los tratamientos estadísticamente no difieren entre sí. Concluyendo que, el protocolo utilizado es apropiado para propagar plántulas de Phragmipedium kovachii en condiciones in vitro.

Identificación de subespecies de orquídeas pertenecientes al grupo de epidendrum nocturnum (orchidaceae), mediante la técnica molecular dna barcode

El grupo de Epidendrum nocturnum es un tipo nomenclatural del género Epidendrum. Esta especie está distribuida en toda América tropical: La Florida, México, Colombia, Brasil, Venezuela, Perú, Ecuador y el Caribe. Se estima que aproximadamente existen 35 especies dentro de este grupo. Epidendrum es el segundo género más grande en el Ecuador, por lo que al ser tan amplio genera un problema de clasificación de las especies que lo componen. DNA BARCODE es una técnica molecular que facilita la identificación a nivel molecular de especies, a partir de muestras de ADN secuenciadas, sin embargo, no se tiene la certeza de que el empleo de las regiones genéticas cloroplásticas matK, ycf1 y rpoC1 sirvan para poder realizar una diferenciación puntual a nivel de subespecies. Así, se obtuvieron muestras vegetales de distintas zonas del país: Santo Domingo de los Tsáchilas, Imbabura, Pichincha, Napo y Pastaza para identificarlas mediante la técnica molecular antes mencionada. Se extrajo ADN por el método de Doyle y Doyle, se procedió a realizar una PCR con dichos marcadores moleculares, para secuenciar las muestras. Seguidamente se procedió a limpiar las secuencias obtenidas y trabajar con las que tengan una calidad superior al 40%; con el programa MEGA v 11.0 se elaboraron los árboles filogenéticos, además de un mapa de georreferenciación con la plataforma Google Earth. Finalmente se pudo concluir que el empleo de estos marcadores moleculares sirve para diferenciar las subespecies de E. nocturnum, así mismo se evidencia el fenómeno de especiación ligado a la distribución de las diferentes muestras obtenidas y los cambios a nivel genético presentado.The Epidendrum nocturnum group is a nomenclatural type of the genus Epidendrum. This specie is distributed throughout tropical America: Florida, Mexico, Colombia, Brazil, Venezuela, Peru, Ecuador and the Caribbean. It is estimated that there are approximately 35 species within this group. Epidendrum is the second largest genus in Ecuador, hence being so large generates a problem of classification of the species that compose it. DNA BARCODE is a molecular technique that facilitates the identification of species at the molecular level from sequenced DNA samples; however, it is not certain that the use of the chloroplastic genetic regions matK, ycf1 and rpoC1 can be used to make a specific differentiation at the subspecies level. Thus, plant samples were obtained from different areas of the country: Santo Domingo de los Tsáchilas, Imbabura, Pichincha, Napo and Pastaza to identify them by means of the aforementioned molecular technique. DNA was extracted by the Doyle and Doyle method, and a PCR was performed with these molecular markers to sequence the samples. The sequences obtained were then cleaned and those with a quality higher than 40% were used for the analyses; phylogenetic trees were prepared with the MEGA v 11.0 program, as well as a georeferencing map with the Google Earth platform. Finally, it was possible to conclude that the use of these molecular markers help to differentiate the subspecies of E. nocturnum, and observe a speciation phenomenon linked to the distribution of the different samples obtained due to changes at the genetic level

Análisis molecular de las especies del ecuador del género Restrepia (Orchidaceae) y análisis filogenético de secuencias obtenidas de genbank

El género Restrepia, pertenece a la familia Orchidaceae, la cual se distingue de otros géneros en la sub-tribu Pleurothallidinae por la atenuación del sépalo dorsal y la presencia de osmóforos. Se reconocen 61 especies de Restrepia, distribuidas en todo Centroamérica y en América del Sur como en Venezuela, Colombia, Perú, Bolivia y Ecuador, crece a alturas entre 1000 y 3000 m.s.n.m. en áreas del bosque lluvioso montano. En el país se tienen registradas 20 especies del género Restrepia, de las cuales 9 son endémicas. Varios de los estudios filogenéticos que se han realizado en cuanto al género están desactualizados y por ende no cuentan con una clasificación completa de todas las especies descritas hasta el momento. En el presente estudio se recolectaron 24 muestras vegetales del género Restrepia pertenecientes al Ecuador, se extrajo ADN mediante el método Doyle & Doyle modificado y se amplificaron con los marcadores moleculares matK y rpoC1 con PCR convencional con el uso del kit Phire Plant Direct PCR Master Mix, se elaboraron árboles filogenéticos en base a secuencias obtenidas en GenBank con los métodos de Inferencia Bayesiana y Máxima Verosimilitud (ML), con los modelos evolutivos HKY y Tamura 3-parameter respectivamente. Los análisis de georreferenciación muestran que la zona central del Ecuador es la que presenta mayor presencia de especies del género Restrepia para el cual se elaboró un mapa de distribución de las especies estableciendo la correlación de los datos con la información filogenética.The Restrepia genus belongs to the Orchidaceae family, which is distinguished from other genera in the Pleurothallidinae sub-tribe by the attenuation of the dorsal sepal and the presence of osmophores. 61 species of Restrepia are recognized, distributed throughout Central America and South America such as in Venezuela, Colombia, Peru, Bolivia, and Ecuador, it grows at heights between 1000 and 3000 meters above sea level. in montane rain forest areas. In the country there are 20 registered species of the genus Restrepia, of which 9 are endemic. Several of the phylogenetic studies that have been carried out regarding the genus are outdated and finally do not have a complete classification of all the species described so far. In the present study, 24 plant samples of the genus Restrepia belonging to Ecuador were collected, DNA was extracted using the modified Doyle & Doyle method and amplified with the molecular markers matK and rpoC1 with conventional PCR using the Phire Plant Direct PCR Master Mix kit, phylogenetic trees were elaborated based on sequences obtained in GenBank with the Bayesian Inference and Maximum Likelihood (ML) methods, with the HKY and Tamura 3-parameter evolutionary models, respectively. The georeferencing analyzes show that the central zone of the Equator is the one with the greatest presence of species of the Restrepia genus, for which a distribution map of the species was elaborated with the contribution of the data with the phylogenetic information